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本试剂盒在普通碱裂解法的基础上进行了改进，全新的Lyticase可以有效的破除酵母细胞壁，新型硅基质膜和缓冲液系统能高效专一的结合质粒DNA，同时可以最大限度的去除蛋白及其他杂质，整个过程方便快捷，不需使用有毒有害试剂，可以同时处理多个样品。除适用于酵母细胞外，也可用于大肠杆菌。使用本试剂盒提取的质粒DNA可用于各种分子生物学实验，如连接、转化、测序和文库筛选等。

• 所有组分可在干燥、室温（15～30℃）环境稳定保存1年，将吸附柱置于2～8℃可保存更长时间，加入RNase A的Buffer P1置于2～8℃可稳定保存6个月。
  
• 第一次使用前，将RNase A溶液全部加入到Buffer P1中，混匀，置于2～8℃保存。
  
• 第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在Buffer PW中加入无水乙醇。
  
• 使用前请检查Buffer P2、Buffer N3是否出现结晶或者沉淀，如有结晶或者沉淀现象，可在37℃水浴几分钟，即可恢复澄清。
  
• 注意不要直接接触Buffer P2和Buffer N3，使用后应立即盖紧盖子。
  
• 提取的质粒量与酵母菌株、质粒拷贝数、培养条件等因素有关，通常酵母质粒拷贝数都很低，通过电泳或分光光度计法都很难检测到。

• 取1～5mL酵母培养物（最多不超过5×10⁷个酵母细胞，一般对于酿酒酵母OD600=1.0时，相当于1～2×10⁷细胞/ml）加入离心管（自备）中，12000rpm（~13400×g）离心30秒，收集菌体沉淀，尽量吸弃上清。
  
• 向菌体中加入250μL Buffer P1（请先检查是否已加入RNase A），重悬沉淀。
  
• 在以上混合物中加入40mg的玻璃珠（Glass Beads），涡旋震荡10分钟。
  
• 向离心管中加入250μL Buffer P2，温和地上下颠倒混匀6～8次，室温放置5～10分钟，此时菌液应变得清亮粘稠。
  注意：温和混匀，不要剧烈震荡，以免打断基因组DNA，造成提取的质粒中混有基因组DNA片段。如果溶液未变得清亮，提示可能菌量过大，裂解不彻底，应减少菌体量。
  
• 向离心管中加入350μL Buffer N3，立即温和地上下颠倒混匀6～8次，此时出现白色絮状沉淀，12000rpm离心20分钟。
  注意：Buffer N3加入后应立即混匀，避免产生局部沉淀。
  
• 柱平衡：向已装入收集管的吸附柱DM中加入200μL Buffer PS，12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
  
• 将步骤5所得上清加入到已装入收集管的吸附柱中，注意不要吸出沉淀。
  注意：吸附柱的最大容积为750μL，溶液分2次过柱。
  
• 12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。
  
• 向吸附柱加入150μL Buffer PB，12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
  
• 向吸附柱中加入750μL Buffer PW（请先检查是否已加入无水乙醇），12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液。
  
• 将吸附柱重新放回收收集管中，12000rpm离心2分钟，倒掉废液。将吸附柱置于室温数分钟，以彻底晾干。
  注意：这一步的目的是将吸附柱中残余乙醇去除，乙醇残留会影响后续的酶促反应（酶切、PCR等）。
  
• 将吸附柱置于一个新的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加50～100μL Buffer EB，室温放置数分钟，13000rpm离心1分钟，将质粒溶液收集到离心管中。-20℃保存质粒。
  注意：
  
  • 为了增加质粒的回收效率，可将得到的溶液重新加入到吸附柱中，室温放置数分钟，13000rpm离心1分钟，将质粒溶液收集到离心管中。
    
  • 质粒拷贝数较低或＞10kb时，Buffer EB在65～70℃水浴预热，可以增加提取效率。
    
  • 通常酵母质粒拷贝数很低，通过电泳或者分光光度计法都很难检测到。提取的质粒如果用于下一步实验，通常建议使用量为：用作PCR模板可使用1～5μL质粒，用于转化大肠杆菌可使用5～10μL质粒。
    
  • 转化大肠杆菌时应使用商业化高转化效率的感受态细胞。